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海洋研究所 [1]
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专利 [1]
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2011 [1]
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一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法
专利
专利类型: 发明, 专利号: CN201110027643.1, 申请日期: 2011-08-24, 公开日期: 2011-08-24
尤锋
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王伟
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徐冬冬
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张毅
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徐永立
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提交时间:2014/08/04
一种提取单个鱼卵仔鱼微量总DNA的简便快速方法
1尾仔鱼/0.05?0.5mL无水乙醇
2)样品中固定液的去除:取步骤1)所得已固定的单个鱼卵或仔鱼样品
3)样品消化:取上述洗涤过的单个鱼卵或仔鱼
4)提取总DNA:将步骤3)消化至澄清的溶液中加入100?300μL?5?6mol/L?NaCl溶液
其特征在于:1)样品固定:采集鱼卵或仔鱼
加入生理盐水洗涤
加入100?300μL?DNA提取缓冲液和10?30μL细胞裂解缓冲液
震荡20?30秒。15000g离心30分钟
滤去水后立即加入无水乙醇
1000?2000g离心20?60秒去除多余生理盐水
使细胞破壁
吸取上清液使蛋白质去除
而后于?20℃或室温保存备用
再用滤纸吸干样品
而后将细胞破壁的单个鱼卵或仔鱼加入10?100μg蛋白酶K和10?100μg?RNA酶
然后在上清液中加入等体积异丙醇
鱼卵或仔鱼与无水乙醇比例为:1mL鱼卵/2?5mL无水乙醇
重复2?3次
震荡混匀
轻轻混匀
于50?70℃温育
?20℃静置1?2小时
每10?20分钟颠倒混匀一次
15000g离心15分钟
消化至溶液澄清
沉淀即得到单个鱼卵仔鱼微量总DNA。
待用
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