| 题名 | 半滑舌鳎基因CathepsinB、D 和L 的鉴定与表达分析 |
| 作者 | 陈玲 |
| 学位类别 | 硕士 |
| 答辩日期 | 2012-05-13 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 导师 | 孙黎 |
| 关键词 | 组织蛋白酶 半滑舌鳎 表达 半胱氨酸蛋白酶 |
| 学位专业 | 海洋生物学 |
| 中文摘要 | 组织蛋白酶是溶酶体蛋白酶中的一大家族，在蛋白降解、抗原提呈、细胞凋亡以及炎症反应中发挥重要作用。组织蛋白酶家族可以分为三类，分别为半胱氨酸蛋白酶，包括组织蛋白酶B、L；丝氨酸蛋白酶；天冬氨酸蛋白酶，包括组织蛋白酶D。组织蛋白酶B、D、L已在许多其他物种如哺乳动物、昆虫和贝类得到鉴定，并进行了相关功能研究，但是，在鱼类中它们的研究却很少。本研究从半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)中克隆了组织蛋白酶B、D、L的同源物(CsCatL，CsCatD，CsCatL)，并分析了它们在不同条件下的表达变化情况。 CsCatB编码322个氨基酸，与其他硬骨鱼及哺乳动物中的组织蛋白酶B有70–81.3%的全序列同源性。CsCatB具有典型组织蛋白酶的结构特征，包括有前肽区和半胱氨酸蛋白酶结构域，后者包含了四个高度保守的催化位点Q101, C107, H277, 和N297。实时定量RT-PCR结果显示，CsCatB在多个组织中均有表达，在细菌和亚单位疫苗刺激后会上调表达。重组表达的CsCatB表现出明显的蛋白酶活性，且其最适温度为35°C，最适PH为5.5。与之相反，CsCatB的H277突变为谷氨酸后，其蛋白酶活性显著下降。 CsCatD编码396个氨基酸，与其他鱼类及哺乳动物中的组织蛋白酶B有67.6-88.4%的全序列同源性。CsCatD具有天冬氨酸内肽酶结构域，包含由两个天冬氨酸形成的的催化位点。CsCatL编码336个氨基酸，与其他鱼类以及哺乳动物有64.7-90.2%的同源性。CsCatL N端具有前肽抑制结构域，其下游是半胱氨酸蛋白酶结构域，含4个高度保守的催化位点，分别为Gln-133, Cys-139, His-279, 和 Asn-303。重组表达的CsCatL表现明显的蛋白酶活性。实时定量RT-PCR结果显示，CsCatD和CsCatL在多个组织中都有组成型表达，其表达量在心脏中最低，在肝脏中最高。在受到细菌、病毒以及亚单位疫苗刺激后，CsCatD和CsCatL在头肾及脾脏中都有显著性的上调表达，并且这种诱导型表达是时间依赖性的。 上述结果显示，CsCatB 和 CsCatD具有蛋白酶活性，并且可能在机体对细菌及疫苗的免疫应答中发挥作用，CsCatD和CsCatL除可能具有上述免疫功能外，还可能涉及到机体对病毒的免疫应答。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2014-08-08 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17798]  |
| 专题 | 海洋研究所_实验海洋生物学重点实验室 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 陈玲. 半滑舌鳎基因CathepsinB、D 和L 的鉴定与表达分析[D]. 中国科学院研究生院. 2012. |
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