| 题名 | 蝎毒多肽正交分离体系的研究与活性多肽的发现 |
| 作者 | 许俊彦 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2013-01-24 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 导师 | 梁鑫淼 |
| 学位专业 | 分析化学 |
| 中文摘要 | 蝎毒是一个非常宝贵的天然多肽库，其中含有许多神经毒素多肽，是研究离子通道生理功能非常有用的药理工具，而要清楚地研究这些毒素的结构和生物学意义，纯化分离是首要步骤，因此发展多肽的新分离分析方法显得非常重要。基于本课题组开发的新型色谱固定相，本文发展了两种具有高正交性的二维分离体系，用于东亚钳蝎（Buthus martensi Karsch，BmK）蝎毒多肽的分离和鉴定，并结合活性筛选，发现了一个脑啡肽-类似的多肽BmK-YA，能作用于阿片受体，具有镇痛的效果。 首先，利用本课题组新型的麦芽糖亲水色谱固定相Click Maltose，与C18联用构建了二维反相-亲水体系（RP-HILIC）用于蝎毒短链多肽的分离。由于该二维体系具有较高的正交性，分离得到了18个短链多肽，并结合酶切和质谱进行结构鉴定，除了10个已知的多肽外，还包括4个转录水平的多肽，2个新断裂方式的多肽和2个新型多肽，命名为BmKK12和BmKK16。通过与蛋白数据中其他类似序列的对比，我们推测这两个新型多肽应属于钾离子通道α-KTx 17亚家族，并简单讨论了它们的生物活性。 其次，考察了本课题组开发的Click OEG固定相的反相/离子交换的混合模式色谱保留行为，然后与C18构建了二维混合模式反相-反相体系用于蝎毒长链多肽的纯化分离。我们对其中两个馏分做了深入的分离分析，纯化得到了11个长链多肽，通过鉴定，发现了1个新型多肽，5个转录水平多肽和5个已知的蛋白水平多肽，并通过序列对比，对它们的结构和家族归属做了简单的分析。 最后，通过构建的二维RP-HILIC分离体系，从东亚钳蝎蝎毒中筛选并鉴定了一个新型多肽BmK-YA，具有脑啡肽类似的序列，能作用于哺乳动物δ-阿片受体亚型。并通过基因克隆发现BmK-YA的前体蛋白包含了4个循环的BmK-YA序列和His4-BmK-YA序列，His4-BmK-YA不对阿片受体产生活性，结果表明BmK-YA是一个内源性活性多肽，也是目前在蝎毒中发现的第一个G蛋白偶联受体（GPCRs）活性多肽，它的发现预示着蝎毒将来会成为发现GPCRs活性多肽的重要来源。 |
| 语种 | 中文 |
| 学科主题 | 分析化学 |
| 公开日期 | 2013-10-10 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://159.226.238.44/handle/321008/116768]  |
| 专题 | 大连化学物理研究所_中国科学院大连化学物理研究所 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 许俊彦. 蝎毒多肽正交分离体系的研究与活性多肽的发现[D]. 中国科学院研究生院. 2013. |
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