题名毛菊苣指纹图谱及其总倍半萜磁性纳米脂质体的研究
作者罗玉琴
答辩日期2020-06-06
授予单位中国科学院大学
授予地点中国科学院新疆理化技术研究所
导师阿吉艾克拜尔·艾萨
关键词毛菊苣总倍半萜 磁性纳米脂质体 磁靶向给药系统 肝损伤
学位名称博士
学位专业有机化学
英文摘要

肝脏是人体最重要的脏器,由于它承担着代谢、消化、解毒和分泌等任务,容易受到各种毒物的攻击,引发肝脏功能的损伤。菊科植物毛菊苣Cichorium glandulosum Boiss. et Huet在新疆南北疆地区有大量栽培,为新疆民族医习用药材。毛菊苣总倍半萜有效部位(Sesquiterpene-Rich Fraction, SRF)是毛菊苣地上部分提取得到的富含天然倍半萜类活性成分,已证明具有确切的肝损伤保护作用。由于普通给药剂型在肝损伤部位较难达到有效血药浓度,而将药物与纳米级的磁性粒子结合制备成肝脏靶向磁性纳米脂质体,在外加磁场的作用下,可将药物定位于靶组织以增加靶部位的有效血药浓度并减少药物对全身正常组织的毒性和副作用,从而提高疗效。 本课题选择毛菊苣地上部位为研究对象,分别采用高效液相色谱指纹图谱和薄层色谱指纹图谱,比较了在相同生长期(花前期、开花期和成熟期)下不同产地、不同采集年份其化学成分指纹图谱的差异。以SRF为模型药物,采用乙醇注入-超声沉淀法制备成磁性脂质体纳米粒(magnetic liposome nanoparticle, SRF-MLN);以活性成分山莴苣素的含量及药剂学特性为评价指标,采用正交试验设计优化SRF-MLN的制备工艺;以粒径、Zeta电位和包封率为考察指标,对SRF-MLN的稳定性进行了考察。分别比较了有效部位 (SRF)、有效部位普通脂质体 (SRF liposome, SRF-LP)和有效部位磁性脂质体纳米粒 (SRF-MLN)三种溶液在不同时间的体外释药行为及在小鼠体内不同组织器官的药物浓度,并以AUC0-12h、平均滞留时间(MRT)和靶向效率(TE)、相对靶向效率(RTE)、靶向指数(TI)为指标,研究三种溶液在小鼠体内的组织分布并评价其靶向效果。采用四氯化碳(CCl4)诱导的化学性肝损伤模型和卡介苗(BCG)+脂多糖(LPS)诱导的免疫性肝损伤模型进行体内药效试验,分别尾静脉注射给药SRF溶液和SRF-MLN溶液(加磁场),检测小鼠血清中谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;处死小鼠后取肝组织,检测肝匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,计算肝指数并观察其病理学变化,研究SRF-MLN对小鼠化学性和免疫性肝损伤的保护作用。研究结果如下:1、采用高效液相色谱技术建立药材HPLC指纹图谱,使用«中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004 » A 版软件对不同批次的毛菊苣药材进行相似度评价,结果23批样本间有8个共有指纹峰,其峰面积的RSD差异较大。但在相同生长期下,不同产地和不同采集年份的毛菊苣药材化学成分的共有指纹峰与对照图谱的相似性较大;运用SPSS 23.0软件对不同批次的样本进行系统聚类分析,结果批次间差异较大。利用薄层色谱指纹图谱和薄层色谱-自显影技术对在相同生长期下不同产地、不同采集年份的毛菊苣药材进行薄层扫描以及抗氧化活性的研究,结果表明相同生长期下各样本的薄层色谱指纹图谱较一致,花前期和开花期对DPPH和ABTS具有一定抗氧化活性。2、采用乙醇注入-超声沉淀法制备的SRF-MLN,呈圆球型且呈单分散分布,平均粒径为65.35 nm, PDI为0.157,Zeta电位为-17.5mV,包封率为91.3%±1.5%(RSD%=1.5),载药率为4.7%±0.3%(RSD%=0.7);体外释放研究表明,相同时间内SRF-MLN的累积释放量远低于SRF溶液,4h时仅为42.2%,12h时为93.1%,结果稳定;3、通过小鼠体内组织分布研究结果表明,在动物的肝部体外施加磁场,尾静脉分别注射给药三种溶液后,SRF-MLN组在心、肝、脾、肺、肾脏组织中药物浓度较SRF组、SRF-LP组显著提高,尤其在肝脏中;与普通脂质体相比,SRF-MLN在肝脏中的MRT增大了4倍,山莴苣素含量提高了大约42倍,差异具有显著性(p<0.01);TE仅在肝部有增加,且TI大于10。4、体内药效实验结果表明,与模型组比较,SRF-MLN高、中、低剂量组能对抗化学性和免疫性肝损伤引起的小鼠血清中的ALT和AST的升高,同时,提高肝组织中SOD的活性,降低肝脏中MDA含量,差异均有显著性意义(P<0.05和P<0.01)。通过肝脏组织病理观察,高剂量给药组和阳性药联苯双酯滴丸效果相当。利用建立的毛菊苣药材指纹图谱,确定不同采收条件下的药材化学成分差异,为毛菊苣药材规范化种植、科学采收、有效部位的制备提供依据;制备的SRF-MLN在外加磁场的作用下,可改变药物在动物体内的分布,延长药物的作用时间,提高药物在肝部位的特异性和靶向性,对小鼠急性化学性和免疫性肝损伤具有一定的保护作用。其作用机制可能通过抗脂质过氧化保护细胞膜,减轻肝细胞变性,提高机体抗氧化应激作用有关。该研究结果为毛菊苣相关制剂的研究奠定基础,也为民族药有效部位新型肝靶向给药系统的制备与评价提供参考。

内容类型学位论文
源URL[http://ir.xjipc.cas.cn/handle/365002/7710]  
专题新疆理化技术研究所_资源化学研究室
推荐引用方式
GB/T 7714
罗玉琴. 毛菊苣指纹图谱及其总倍半萜磁性纳米脂质体的研究[D]. 中国科学院新疆理化技术研究所. 中国科学院大学. 2020.
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