基于报告基因系统的肝细胞核因子4活性检测体系的建立

doi:10.16781/j.0258-879x.2017.09.1112

	基于报告基因系统的肝细胞核因子4活性检测体系的建立
	孙冰洁 1; 陈示洁 2; 邓龙飞 1; 丁晨虹 3; 陈斐 3; 罗成 2; 谢渭芬 3; 张新 1
刊名	第二军医大学学报
	2017
卷号	38 期号:9 页码:1112
关键词	肝细胞核因子4α 报告基因系统小分子化合物
ISSN号	0258-879X
DOI	10.16781/j.0258-879x.2017.09.1112
英文摘要	目的建立一个基于荧光素酶报告基因系统的肝细胞核因子4α(HNF4α)活性检测系统,筛选可调控HNF4α活性的小分子化合物。方法采用亲和层析法纯化HNF4α蛋白,行蛋白热迁移实验检测相关DNA片段及小分子化合物与HNF4α蛋白的直接相互作用。分别构建含有3个拷贝和9个拷贝的Ninjurin 1(NINJ1)基因启动子区HNF4α反应元件的荧光素酶报告基因质粒pGL3-NINJ1-3p和pGL3-NINJ1-9p,转染肝癌细胞,采用荧光素酶报告基因法检测肝癌细胞内HNF4α转录活性的改变,qPCR检测小分子化合物木犀草素或阿尔维林处理后肝癌细胞中HNF4α及下游基因的表达情况,荧光素酶报告基因法检测小分子化合物处理后细胞内HNF4α转录活性的改变。结果蛋白热迁移实验证实,NINJ1基因启动子区HNF4α的DNA结合片段可与HNF4α蛋白结合。在过表达HNF4α的肝癌细胞中, pGL3-NINJ1-3p和pGL3-NINJ1-9p均可检测到肝癌细胞中HNF4α活性的改变,且pGL3-NINJ1-9p较pGL3-NINJ1-3p的检测灵敏度更高(P<0.01)。木犀草素和阿尔维林与HNF4α蛋白存在直接相互作用,分别下调和上调HNF4α靶基因;pGL3-NINJ1-9p可检测到木犀草素和阿尔维林对HNF4α转录活性的影响。结论利用报告基因载体pGL3-NINJ1-9p成功建立了HNF4α活性的检测系统,为筛选调控HNF4α活性的小分子化合物等提供了基础工具。
语种	英语
内容类型	期刊论文
源URL	[http://119.78.100.183/handle/2S10ELR8/286055]
专题	中国科学院上海药物研究所
作者单位	1.华东理工大学 2.中国科学院上海药物研究所 3.第二军医大学
推荐引用方式 GB/T 7714	孙冰洁,陈示洁,邓龙飞,等. 基于报告基因系统的肝细胞核因子4活性检测体系的建立[J]. 第二军医大学学报,2017,38(9):1112.
APA	孙冰洁.,陈示洁.,邓龙飞.,丁晨虹.,陈斐.,...&张新.(2017).基于报告基因系统的肝细胞核因子4活性检测体系的建立.第二军医大学学报,38(9),1112.
MLA	孙冰洁,et al."基于报告基因系统的肝细胞核因子4活性检测体系的建立".第二军医大学学报 38.9(2017):1112.