Chimmitecan引起肿瘤细胞周期阻滞和DNA损伤修复关系研究

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	Chimmitecan引起肿瘤细胞周期阻滞和DNA损伤修复关系研究
	黄敏; 朱虹; 缪泽鸿; 蔡育军; 吕伟; 丁健
	2007-06-01
关键词	肿瘤细胞通路功能周期阻滞 DNA
页码	1
英文摘要	目的:Chimmitecan 是上海药物研究所设计合成的新的脂溶性喜树碱(Camptothecin, CPT)衍生物。前期研究表明,该化合物比临床使用的同类化合物显示出较好的抗肿瘤活性和药理学特性,其作用机理是引起拓扑异构酶Ⅰ介导的肿瘤细胞 DNA 损伤(Clin Cancer Res,2007, 13:1298—307)。本研究旨在进一步探讨 Chimmitecan 激活的 DNA 损伤应答中细胞周期阻滞和同源重组(Homologous recombination,HR)修复通路之间的内在联系。方法:采用中性单细胞凝胶电泳和免疫荧光检测组蛋白 H2AX 磷酸化(γ-H2AX)激活的方法评价细胞内 DNA 双链断裂(Double-strand breaks,DSBs)损伤程度;流式细胞术检测细胞周期分布;Western Blot 分析法检测药物引起的蛋白水平的变化;另外,采用 RNA 干扰的方法通过降低相关蛋白的表达水平分别干扰其正常功能。结果:Chimmitecan 和 CPT 作用1 h 能剂量依赖地引起 HCT116结肠癌细胞 DSBs。后者能同时快速激活 DNA 修复和细胞周期阻滞通路,主要激活 RAD51介导的 HR 修复通路,并引起细胞发生一过性的 S 期延迟和长期的 G2/M 期阻滞。药物作用结束后撤药培养不同时间,发现 DSBs 能在6 h 内被快速修复,随后细胞通过细胞周期检查点,逐渐恢复正常的周期分布。采用 RAD51 siRNA 干扰 HR 修复通路的功能,使 CPT 和 Chimmitecan 引起的 DSBs 不能及时修复,发现药物引起的细胞周期分布难以顺利恢复,细胞长期地阻滞于 G2/M 期;另一方面,干扰周期蛋白激酶 Chk1或 Chk2除了能够有效阻止药物引起的细胞周期阻滞的发生,同时也会不同程度地影响细胞的修复效率,使 DSBs 不能修复或修复减慢。结论: Chimmitecan 能引起 HCT-116细胞 DSBs,并同时激活细胞的 HR 修复和细胞周期阻滞通路。这两条通路的功能相互影响、相互制约。细胞能否顺利渡过药物引起的 DNA 损伤危机,依赖于这两条通路的正常功能和协调配合。我们的研究为阐明 DNA 损伤应答系统中细胞周期阻滞和修复通路之间的相互关系提供了直接的实验证据,深化了目前对于两者关系的认识。
会议录	2007医学前沿论坛暨第十届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集
文献子类	Article
语种	中文
内容类型	会议论文
源URL	[http://119.78.100.183/handle/2S10ELR8/267496]
专题	药理学第一研究室
作者单位	中国科学院上海药物研究所,药理学第一研究室,上海 201203, 中国.
推荐引用方式 GB/T 7714	黄敏,朱虹,缪泽鸿,等. Chimmitecan引起肿瘤细胞周期阻滞和DNA损伤修复关系研究[C]. 见:.