| 题名 | 斯达氏油脂酵母油脂积累相关基因的研究 |
| 作者 | 唐伟 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 2010-05-26 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 导师 | 赵宗保 |
| 学位专业 | 生物化工 |
| 中文摘要 | 自然界中部分微生物能在适当的培养条件下，胞内贮存质量超过其细胞干重20%(w/w)的油脂，具有这种表型的微生物称为产油微生物。微生物油脂的长链脂肪酸成分与普通植物油脂相似，而有些微生物能生产多不饱和脂肪酸，所以微生物油脂发酵可文以斯达氏油脂酵母AS.2.1560 为研究对象，着重考察了异柠檬酸脱氢酶基因及苹果酸酶基因与斯达氏油脂酵母AS.2.1560 细胞油脂积累的相关性，为构建油脂酵母工程菌打下基础。 第一，优化了斯达氏油脂酵母AS2.1560 细胞总RNA 提取方法，将细胞总RNA 逆转录后作为模板，采用RACE 技术克隆得到了全长cDNA 序列为1,128 bp 的Lsactin 基因。 第二，分析发现随着菌体油脂含量的增加，细胞内外柠檬酸增加，而异柠檬酸脱氢酶活性下降。克隆了LsIDH 两个亚基基因LsIDH1 和LsIDH2，全长cDNA序列分别为1,122bp 和1,134 bp，荧光定量PCR 方法检测到LsIDH1 基因和LsIDH2 基因转录水平随着细胞内油脂积累而下降，说明LsIDH 可能参与调节细胞内油脂积累的过程。 第三，成功地克隆了细胞质苹果酸酶基因LsME1 全长cDNA 序列，长度为1,719 bp。通过构建原核表达载体及重组蛋白高表达和纯化方法，获得了LsME1 蛋白并进行了初步的生物化学表征，发现LsME1 偏好NAD+。此外，构建了携带LsME1 组成型表达载体的酿酒酵母BY4741 工程菌株。最后，初步探索了斯达氏油脂酵母AS2.1560 的遗传操作方法。 |
| 语种 | 中文 |
| 学科主题 | 物理化学 |
| 公开日期 | 2012-07-09 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://159.226.238.44/handle/321008/116511]  |
| 专题 | 大连化学物理研究所_中国科学院大连化学物理研究所 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 唐伟. 斯达氏油脂酵母油脂积累相关基因的研究[D]. 中国科学院研究生院. 2010. |
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