| 题名 | 高原鼠兔（Ochotona curzoniae）血浆NO含量测定及eNOS cDNA部分序列的克隆 |
| 作者 | 杨晓林 |
| 学位类别 | 硕士 |
| 答辩日期 | 2010-05 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 授予地点 | 北京 |
| 导师 | 赵新全 |
| 关键词 | 高原鼠兔 NO eNOS HPLC RACE RT-PCR |
| 学位专业 | 动物学 |
| 中文摘要 | NO是内皮依赖性血管舒张因子(endothelium-derived relaxing factor，EDRF)的代表，由一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)作用于L-精氨酸(L-arginine，L-Arg)、还原性辅酶II（NADPH）和分子氧所产生。NOS有三种同功酶，分别是内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）和神经型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase，nNOS）；其中eNOS主要存在于动静脉的血管内皮细胞，与血管收缩和舒张有着直接的关系。高原鼠兔（Ochotona curzoniae），世居在青藏高原3200m以上的高寒草甸、高寒草原上，是青藏高原地区的关键种和特有种，历经长期的自然选择，其生理生化、解剖学和组织学等研究表明其是一种典型的低氧适应动物。为研究高原鼠兔eNOS在其低氧适应中的作用，本研究进行了如下实验：（1）运用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）测定不同海拔条件下高原鼠兔血浆中硝酸根（NO3-）的含量来间接反映其NO含量；（2）以高原鼠兔肺组织RNA为模板，RT-PCR和RACE技术扩增eNOS cDNA的部分片段并进行序列分析。主要研究结论如下： （1） 建立了HPLC测定高原鼠兔血浆内NO的方法；并测得青海青藏高原地区的高原鼠兔血浆NO含量范围在在73.0mg/L ～168.2mg/L。 （2） HPLC法测定结果发现，高海拔即低氧分压条件下，高原鼠兔血内NO含量较高；不同海拔地区的高原鼠兔NO含量有差别。结果暗示高山动物在低氧诱导下，NOS活性增加。 （3） 运用RT-PCR技术，扩增得到两段高原鼠兔eNOS cDNA 序列片段，分别是873bp和364bp，经序列分析，跟挪威鼠和家鼠的同源性达88%，跟人的同源性达91%。 （4） 把两段序列拼接，目前已得到1206bp的高原鼠兔eNOS cDNA序列； RNA和蛋白二级结构预测结果显示其二级结构稳定；此部分蛋白组成为а/β结构类，а螺旋47个，β-折叠99个，β-转角155个，无规则卷曲97处。 （5） 经同源比对发现，拼接序列在氨基酸水平含两个特异位点，是参与比较的平原动物所没有的，可能跟低氧适应有关。 |
| 语种 | 中文 |
| 学科主题 | 生物科学 |
| 公开日期 | 2012-05-10 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://ir.nwipb.ac.cn/handle/363003/3428]  |
| 专题 | 西北高原生物研究所_中国科学院西北高原生物研究所 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 杨晓林. 高原鼠兔（Ochotona curzoniae）血浆NO含量测定及eNOS cDNA部分序列的克隆[D]. 北京. 中国科学院研究生院. 2010. |
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