本发明涉及一种羔羊第四胃有效成分提取物的制备方法及用途，该方法将羔羊第四胃在低温下加入石油醚脱脂，脱脂后利用液氮冷冻，研磨粉碎，加入磷酸盐缓冲液溶解，低温自溶，利用盐酸溶液调节pH值3.3，低温下激活，再用氧化钠溶液调节pH值为5.6，过滤，离心，弃渣，上清液利用蒸馏水透析脱盐，离心去除透析形成的沉淀物（盐溶蛋白）后，上清液冷冻干燥即得提取物。经测试：本发明获得的提取物蛋白含量达到64.3%，凝乳酶活性为25182 Ru/g，胃蛋白酶活性为3796.4 u/g，蛋白水解活力为4641.1 u/g，十二烷基硫酸钠‑聚丙烯酰胺凝胶电泳图中凝乳酶及胃蛋白酶条带清晰。该方法得到提取物蛋白质纯度高、生物活性强，可应用于作为治疗或预防各种胃病相关的药物或保健品的制备原料。