题名 | 慢生型大豆根瘤菌GX201脯氨酸脱氢酶基因的克隆和鉴定 |
作者 | 何曙光 |
答辩日期 | 1998 |
文献子类 | 博士 |
授予单位 | 中国科学院沈阳应用生态研究所 |
授予地点 | 中国科学院沈阳应用生态研究所 |
关键词 | 慢生型大豆根瘤菌 脯氨酸脱氢酶基因 基因文库 |
学位专业 | 微生物学 |
英文摘要 | 以广谱宿主范围柯斯质粒pLAFR3为载体在大肠杆菌菌DH5α中构建了慢生型大豆根瘤菌菌株GX201的一个基因文库。根据已报道的慢生型大豆根瘤菌菌株JH的脯氨酸脱氢酶基因序列的高度保守区域设计了一对寡核苷酸引物,应用该对引物通过PCR从慢生型大豆根瘤菌GX201基因组DNA中扩增出一个PCR产物,DNA测序表明该产物为443bp,它和慢生型大豆根瘤菌JH的脯氨酸脱氢酶基因具有93.54%的同源性。以该PCR产物为探针和慢生型大豆根瘤菌GX201基因文库作菌落原位杂交,一共得到5个可能的阳性克隆。再以该PCR产物和这些阳性克隆的EcoRI酶切片的质粒DNA Southern杂交,结果只有一个克隆的红2.5kb EcoRI片段显示杂交,该重组质粒被命名为PGXN300,其上含有约16kb的插入片段,确定了BamHI EcoRI和PstI在该DNA顺序上的酶切位点,杂交的2.5kb EcoRI片段位于插入片段的中间位置。通过三亲本接合将pGXN300导入到快生型大豆根瘤菌HN01中而获得工程菌GX300。植株水培法结瘤试验表明GX300比出发菌株HN01在大豆柳江1号上的结瘤数显著提高,但根瘤的重量和植株干重与出发菌株相比并没有差异。 |
语种 | 中文 |
公开日期 | 2010-12-15 |
页码 | 97 |
内容类型 | 学位论文 |
源URL | [http://210.72.129.5/handle/321005/3019] ![]() |
专题 | 沈阳应用生态研究所_沈阳应用生态研究所 |
推荐引用方式 GB/T 7714 | 何曙光. 慢生型大豆根瘤菌GX201脯氨酸脱氢酶基因的克隆和鉴定[D]. 中国科学院沈阳应用生态研究所. 中国科学院沈阳应用生态研究所. 1998. |
个性服务 |
查看访问统计 |
相关权益政策 |
暂无数据 |
收藏/分享 |
除非特别说明,本系统中所有内容都受版权保护,并保留所有权利。
修改评论