| 题名 | 牦牛肝蛋白分离纯化及其活性研究 |
| 作者 | 柳青海 |
| 答辩日期 | 2012-05 |
| 其他责任者 | 李天才 |
| 英文摘要 | 牦牛(Bos grunniens)属于偶蹄目、牛科、牛亚科动物中的稀有种。牦牛肝为牦牛肉加工过程中的副产物，本文以牦牛肝为研究对象，进行牦牛肝蛋白提取分离及活性研究。采用磷酸缓冲液提取法提取牦牛肝蛋白，并通过单因素实验、响应面法对牦牛肝蛋白提取工艺进行优化。采用DEAE-52和Sephadex G-200层析柱对牦牛肝蛋白进行分离纯化。对纯化所得蛋白，采用邻苯三酚自氧化法和水杨酸比色法，进行体外抗氧化活性研究；采用活化部分凝血酶时间、凝血酶时间和凝血酶原时间实验，进行抗凝血活性研究；采用MTT实验和流式细胞实验，进行抗癌活性研究。实验结果如下： 1.新鲜牦牛肝中粗蛋白含量为19.7％。 2.采用磷酸缓冲液提取硫酸铵分级沉淀法提取蛋白，通过单因素实验和四因素三水平响应面法对提取工艺进行优化，提取工艺为：液料比（v:w）为7ml·g-1、pH 7.2、时间4.8h、温度15℃，在此条件下平均提取率为84.23％。 3.上述条件下所得蛋白经DEAE-52与Sephadex G-200层析柱，得到7个蛋白组分，经过SDS-PAGE对其纯度鉴定，结果都为均一条带，初步认为均为单一蛋白，分别命名为BGP1、BGP2、BGP3、BGP4、BGP5、BGP6、BGP7，分子量范围97.2KDa-116KDa。 4.纯化后各蛋白对二苯代苦味酰基、羟基和超氧阴离子自由基有较强的清除作用。其中，BGP5在250mg·L-1时对二苯代苦味酰基、羟基和超氧阴离子自由基的清除率分别为75％、64.44％和82.91％。 5.纯化后各蛋白对兔血的活化部分凝血酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）和凝血酶原时间（PT）具有一定的延长作用，其中BGP1在浓度为60mg·L-1时，对其延长时间分别为182.67s、43.23s和55.70s。 6.纯化后各蛋白对人肝癌细胞株HepG2细胞具有一定的抑制作用，其抑制率随剂量的增加和作用时间的延长而上升，呈明显的剂量和时间依赖性，其中BGP1、BGP4和BGP6抑制作用更加明显。经牦牛肝蛋白作用后的细胞形态发生明显改变，呈现出生长受阻状态，有些细胞脱落，细胞数目减少。实验组中，G0/G1和G2/M期细胞比例下降，S期所占比例明显增高，HepG2细胞在牦牛肝蛋白作用下发生S期阻滞，细胞进入G2期受阻，并产生凋亡。 |
| 出处 | 柳青海.牦牛肝蛋白分离纯化及其活性研究[硕士].北京.中国科学院研究生院.2012 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://210.75.249.4/handle/363003/3492]  |
| 专题 | 西北高原生物研究所_中国科学院西北高原生物研究所 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 柳青海. 牦牛肝蛋白分离纯化及其活性研究[D]. 2012. |
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