| 题名 | 应用高通量测序分析 H7N9 流感病毒疫苗免疫猕猴后抗体组库变化的研究 |
| 作者 | 陈秭宜 |
| 答辩日期 | 2015-06-10 |
| 文献子类 | 硕士 |
| 授予单位 | 中国科学院大学 |
| 授予地点 | 广州生物院 |
| 导师 | 陈凌 |
| 关键词 | H7N9 禽流感病毒 中国猕猴 抗体 抗体组库 高通量测序技术 |
| 学位名称 | 工程硕士 |
| 其他题名 | Analysis of antibody repertoire of Chinese Rhesus Macaque after immunization with H7N9 Influenza Vac |
| 学位专业 | 生物工程 |
| 英文摘要 | 近年来发生的H5N1，H1N1以及H7N9等禽流感由于发病病情危重，病死率高，引起了广泛的公众恐慌，并造成巨大的经济损失。现有的抗流感药物M2阻断剂如金刚烷胺，神经氨酸酶抑制剂如奥司他韦等并没有明显降低重症患者的死亡率，而利用康复者血清可以有效救治临床重症患者，因此抗流感病毒治疗性中和抗体的研发成为近期的研究热点。抗流感病毒治疗性中和抗体基因可以直接从流感感染后的康复者志愿者获得，但是这些抗体的中和效价可能不高，因而通过多次免疫非人灵长类动物如猕猴等可成为获得与人高度同源的高效价抗体的重要方式。以猕猴为模型的单细胞PCR技术近来在国际上被尝试用于从猕猴体内筛选出高亲和力抗体，但是以印度猕猴引物PCR扩增中国猕猴抗体序列的效率很低，且目前尚未有关于中国猕猴抗体基因扩增引物的报道，因此需要设计出专门针对中国猕猴的引物。本论文研究的第一部分首先通过比对已知人抗体基因组和猕猴的全基因组序列，结合我们对中国猕猴抗体组库进行高通量测序的结果，注释获得65条中国猕猴重链V基因、59条轻链λ链V基因、83条轻链κ链V基因，初步建立了中国猕猴的抗体基因库信息，同时获得了大多数抗体基因的Leader序列和RSS序列，根据注释得到的猕猴抗体序列设计和建立了适合扩增中国猕猴的抗体多变区基因引物组。本研究对中国猕猴抗体基因组进行注释，该部分研究结果目前在国际上尚无类似报道，为确定中国猕猴单细胞PCR扩增抗体序列奠定了基础。 体内的抗体组库（antibody repertoire）是对传染性疾病最重要的防御体系，可以针对性的保护机体抵御病原体的侵袭。然而，感染或免疫病原体如H7N9流感病毒后体内的抗体组库到底如何变化以产生有效的抗H7N9的特异性抗体是个尚未有答案的科学问题。因此，本论文研究的第二部分以与人基因组及免疫组高度相似的灵长类动物中国猕猴为模型，通过高通量测序免疫后抗体组库，建立抗体组库网状结构，分析抗体组库谱系结构等生物信息学方法对H7N9流感病毒灭活疫苗免疫前后猕猴体内抗体组库进行分析。分析结果表明相比较于免疫前，免疫H7N9流感病毒疫苗后，抗体组库中IGHV1-2、IGHV1-3等基因亚型使用频率明显增加，而IGHV1-18、IGHV1-24等基因亚型使用频率明显降低；同时抗体谱系的结构分析表明免疫后，抗体组库中抗体谱系的多样性增加，抗体序列逐渐集中分布于较大的抗体组库谱系。该部分研究结果目前在国际上尚无类似报道，为研发疫苗及高效价特异性抗体提供新的信息基础和新的思路。 |
| 语种 | 中文 |
| 学科主题 | 生物工程 |
| 页码 | 114 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://ir.foo.ac.cn/handle/2SETSVCV/1120]  |
| 专题 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 作者单位 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 陈秭宜. 应用高通量测序分析 H7N9 流感病毒疫苗免疫猕猴后抗体组库变化的研究[D]. 广州生物院. 中国科学院大学. 2015. |
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