| 题名 | 基于胶体金的核酸恒温扩增技术在血液筛检中的应用及结核分枝杆菌耐药基因突变液相芯片检测 |
| 作者 | 列浦昌 |
| 答辩日期 | 2012-06-01 |
| 文献子类 | 博士 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 授予地点 | 广州生物院 |
| 导师 | 曾令文 |
| 关键词 | 胶体金 等温链置换 液相芯片 结核分枝杆菌 |
| 学位名称 | 博士 |
| 其他题名 | Construction of Colloidal Gold Based Isothermal Amplification Method for Blood Screening and Quantum Dot Based Suspension Array for Detection of Drug Resistant Tuberculosis Mutations |
| 学位专业 | 生物化学与分子生物学 |
| 英文摘要 | 由于通过血液可以传播乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病和梅毒等多种严重的传染性疾病。为了保障临床用血的安全，血液制品的质量，防止供受血者之间的交叉感染和采血及血液制品工作者的健康，进行血液筛查有很大的必要性。目前，在临床上筛选各种血源性传播疾病的方法，主要是免疫学诊断方法。但由于受免疫学诊断方法的灵敏度及与生俱来的限制（感染后窗口期），依然不能完全杜绝阳性病毒血样的漏检，漏检率较高。近年来核酸检测技术的开发，能够显著的缩短病原体检出的窗口期。然而，现在阶段的核酸检测方法一般是费时和劳动密集型，这就阻碍了其在临床的实施和更广泛和更灵活的应用。最近报道的检测方法如实时定量聚合酶链反应（Realtime-PCR），DNA芯片，表面等离子体共振（SPR），和基于荧光检测或化学方法的等温链置换反应，这些方法灵敏度高，特异性好。然而，需要复杂的仪器和高级的技术人员来操作，这就阻碍了其应用。因此，我们仍要寻求高灵敏，高特异性，成本低，易于现场快使检测用的核酸检测理想工具。最近，用于现场快速诊断的核酸生物传感器，因其具有简单、快速的特点引起科学家们很大的兴趣。而在过去的两年中，我们已经开发的基于胶体金技术的生物传感有用于检测蛋白，癌细胞，重金属离子和核酸等。在本论文中，我们首次将胶体金技术与等温置换技术有机地结合起来，研究开发了一种核酸检测生物传感器，该传感器具有以下特点：（1）高灵敏度，最低检测限为0.01fM；（2）高特异性，可区分单碱基突变；（3）全程不需要复杂和昂贵的仪器。运用该生物传感器，可为血液筛查提供一种快速，低成本，半定量核酸样品的检测工具。此外，它可以为遗传性疾病，个性化医疗，癌症相关突变的SNP检测方法。 结核病(TB)是一种古老的疾病，是单病因所引起的感染性疾病，在艾滋病、虐疾，结核病三大传染病中其死亡率最高，每年全球约有200万人死于结核病。中国更是结核病的重灾区，结核病发病总人数位居全球第二，每年死于结核病者约25万。抗结核药物的开发，使结核病有一定控制，但是由于结核病的不规范治疗，不规药用药，从而造就了耐药结核分枝杆菌的产生，继而让结核病死灰复燃、卷土重来。在我国结核病疫情的主要特点之一就是耐药率高，耐多药结核病人数居全球第一。因此，建立适合临床应用的快速耐药检测方法，对于指导结核病临床用药，控制耐药结核病的传播有重大的理论意义和实用价值。 临床结核分枝杆菌的药敏结果是通过培养法得到的，但是该方法快慢依赖于细菌生长速度，通常需要1个月的时间，所以用于指导临床治疗用药有一定的滞后性。近年来，量子点吸引了大多数人的研究兴趣，而且新兴的液相芯片技术为核酸和蛋白质的高通量检测提供可能性。最近的数据表明，利用量子点来代替有机荧光染料可免除很多有机染料固有的限制。量子点有足够荧光强度，不容易光漂白，可循利用，种种特性使检测的灵敏度可达到单分子水平。因此，基于当前结核病分子生物学的研究进展，本文建立了一种新型的结核耐药突变检测方法，应用该方法可同时检测多个耐药突变位点。该方法首先多重扩增编码耐药靶基因。其次，采等位基因特异性引物延伸，区分单碱基突变，最后液相芯片检测。应用本研究建立的方法检测200株耐药结核分枝杆菌，50株敏感株，检测结果与临床培养结果一致。应用该技术平台使得结核杆菌分离株耐药性检测从常规的4-6周的时间缩短到6-8h，与传统方法相比有很大的优越性，采用该方法进行药敏分析，可指导临床疾病治疗，正确用药，该方法亦可用于结核病的流行病学分析。 |
| 语种 | 中文 |
| 学科主题 | 生物化学与分子生物学 |
| 页码 | 69 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://ir.foo.ac.cn/handle/2SETSVCV/998]  |
| 专题 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 作者单位 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 列浦昌. 基于胶体金的核酸恒温扩增技术在血液筛检中的应用及结核分枝杆菌耐药基因突变液相芯片检测[D]. 广州生物院. 中国科学院研究生院. 2012. |
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