| 题名 | 抗流感病毒离子通道蛋白M2抗体和多肽药物的研发 |
| 作者 | 魏国威 |
| 答辩日期 | 2011-07-13 |
| 文献子类 | 博士 |
| 授予单位 | 中国科学院研究生院 |
| 授予地点 | 广州生物院 |
| 导师 | 陈昌友 |
| 关键词 | 流感 噬菌体表面展示技术 M2离子通道 骆驼单域抗体 |
| 学位名称 | 博士 |
| 其他题名 | Discovery and development of the antibody or peptide drugs against influenza A virus M2 ion channel |
| 学位专业 | 生物化学与分子生物学 |
| 英文摘要 | 流行性感冒是由流感病毒引起的季节性传染性疾病，每年都会在全世界流行，导致约25万到50万人的死亡，其波及范围之广，造成经济损失之大，位于传染性疾病之首，是对人类健康形成持续威胁的一类严重的病毒性传染性疾病。现有控制流感的方法疫苗接种和抗流感药物都不能提供对不同流感病毒广泛的有效性保护。A型流感病毒的M2 离子通道蛋白分布于流感病毒表面，是由97个氨基酸组成的跨膜蛋白，形成同源四聚体离子通道。在流感病毒的生活周期中，当流感病毒被细胞内吞后，内涵体中pH下降使M2离子通道打开，氢离子流入病毒颗粒中，病毒颗粒中pH值下降，促使病毒脱壳，同时低pH是流感病毒发生构象变化并实现膜融合的关键。与病毒表面另两种膜蛋白红细胞凝集素(HA)和神经氨酸酶（NA）不同，M2蛋白23个氨基酸的胞外段序列高度保守，是很好的通用疫苗和被动免疫治疗的靶点。 本研究通过基因工程手段和噬菌体表面展示技术结合运用，分别构建人天然非免疫单链抗体（scFv）库、猴免疫单链抗体（scFv）库、人工合成骆驼单域抗体（VHH）库和采用商业化噬菌体展示肽库，研究了利用这些不同抗体库或肽库，采用不同筛选策略，筛选特异性针对M2离子通道的中和抗体或多肽。 其中筛选到特异性抗流感病毒M2离子通道VHH抗体，命名为M2-7A， 用酶联免疫吸附实验（ELISA），间接免疫荧光检测（IFA），和流式细胞仪（FACS）对所获得VHH抗体与M2结合特异性进行鉴定。结果表明M2-7A VHH抗体仅能微弱结合合成的M2胞外段多肽，但是能特异性与天然状态下M2蛋白分子结合，不仅能结合病毒粒子表面M2天然蛋白，而且能特异性识别细胞表面稳定表达的M2分子和病毒感染诱导细胞表面表达的M2蛋白。体外噬斑抑制实验证明其对流感病毒M2野生型和金刚烷胺抗药株病毒都具有抑制作用。小鼠体内实验进一步证实，被动免疫M2-7A VHH抗体对流感病毒攻击小鼠具有治疗性保护作用，能保护动物免受流感A/PR/8/34的致死剂量的侵袭。细胞存活实验提示其可能通过抑制M2离子通道功能行使作用。本研究首次报道能在体外和体内对流感病毒具有广谱抑制作用的针对M2蛋白的VHH抗体，有望成为高致病性流感预防和治疗的广谱性抗体药物。 |
| 语种 | 中文 |
| 学科主题 | 生物化学与分子生物学 |
| 页码 | 160 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://ir.foo.ac.cn/handle/2SETSVCV/971]  |
| 专题 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 作者单位 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 魏国威. 抗流感病毒离子通道蛋白M2抗体和多肽药物的研发[D]. 广州生物院. 中国科学院研究生院. 2011. |
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