| 题名 | 万古霉素及阿尼芬净相关杂质分离鉴定与活性研究 |
| 作者 | 赵澜宁 |
| 答辩日期 | 2017-05 |
| 文献子类 | 硕士 |
| 授予单位 | 中国科学院大学 |
| 导师 | 卢晓霞 |
| 关键词 | 万古霉素 阿尼芬净 相关杂质 分离纯化 结构鉴定 生物活性 |
| 学位专业 | 药物化学 |
| 英文摘要 | 本论文的研究工作包含两个部分：第一部分是万古霉素相关杂质分离提纯、结构鉴定与活性研究；第二部分是阿尼芬净原料药相关杂质分离提纯与结构鉴定。第一部分是万古霉素相关杂质分离提纯、结构鉴定与活性研究。万古霉素是从东方链霉菌的发酵液中分离得到的一种糖肽类抗生素，是目前临床上用于治疗由MRSA引起的严重感染疾病的首选药物。万古霉素中包含多种不易分离纯化的微量杂质，尽管欧洲药典和中国药典已经标注出5种可能存在的相对杂质，但依然有一些小组分杂质没有被分离纯化和结构鉴定，这些发酵或降解产生的相关杂质可能存在严重的毒副作用，也有可能是高活性的新化合物。目前万古霉素的研究主要集中在寻找创造高活性化合物和药物质量控制上，对万古霉素相关杂质进行研究有助于发现毒副作用小、抗菌活性高的新抗生素，也为完善产品质量信息提供基础。因此本文首先对万古霉素产品中相关杂质进行HPLC定位，再从粗品中对相关杂质进行富集纯化，通过反向柱中压层析和高效液相色谱各种分离纯化技术，从万古霉素产品中分离纯化出12个相关杂质，且HPLC纯度大于93%，结合质谱、一维核磁（1H NMR、13C NMR、H-D NMR、DEPT135、DEPT90）、二维核磁（COSY、TOCSY、NOESY、HSQC、HMBC）对12个相关杂质进行结构鉴定，发现5个N-甲基亮氨酸部位发生改变的万古霉素类似物（杂质A、G、J、E、F），4个天冬酰胺部位发生改变的万古霉素类似物（杂质C、D、H、I），1个N-甲基亮氨酸部位、天冬酰胺部位均有所改变的万古霉素类似物（杂质B），2个糖基部位改变的万古霉素类似物（杂质L、O）。其中杂质B、C、H、E、F、J、L、O为已知相关杂质：去甲基及脱氨基万古霉素、脱氨基万古霉素（两种异构体杂质C和杂质H）、去甲基万古霉素（两种异构体杂质E和杂质F）、N，N-二甲基万古霉素、无糖万古霉素和脱万古糖胺单糖万古霉素。杂质A、D、G、I为首次发现的新化合物：二醛基万古霉素、亚甲基万古霉素、醛基万古霉素和开环中间体。对8个已知相关杂质和4个新结构的相关杂质进行抑菌测试，结果显示杂质F对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的抑菌活性与万古霉素相当。随后采用人肾胚细胞测试12个相关杂质对人体潜在的肾胚细胞毒性，结果显示杂质A、B对人肾胚细胞的抑制作用小于万古霉素，体外肾胚细胞毒性较低。最后，对相关杂质的来源进行了简单的分析。本研究首次对万古霉素相关杂质进行系统的分离纯化、结构鉴定和活性研究，共分离鉴定12个相关杂质，其中4个为新发现的化合物，活性测试表明2个相关杂质抑菌活性与万古霉素相当，2个相关杂质的体外肾胚细胞毒性低于万古霉素，这一研究进一步完善了国产万古霉素产品的质量信息，并为寻找抑菌活性高，毒副作用小的新万古霉素类抗生素提供了有利的参考。第二部分是阿尼芬净原料药相关杂质分离提纯与结构鉴定。阿尼芬净是第三代棘白菌素类抗真菌药物，在我国目前处于临床实验阶段，其是从发酵产物半合成而来，产品中可能存在影响药物质量的相关杂质。中国药典规定，在我国生产上市的新药需要进行杂质鉴定研究，而目前尚未有阿尼芬净中相关杂质研究的报道。本文参照辉瑞公司报道的合成路线，合成4批次的阿尼芬净原料药，采用一种新的HPLC 方法和UPLC-MS 方法对自制原料药和辉瑞公司产品中相关杂质的分布情况进行分析，共发现8个潜在的相关杂质。随后利用HPLC定位杂质，并采用制备色谱方法从阿尼芬净粗品中分离纯化出4个相关杂质（杂质I、杂质II、杂质III和杂质VIII），结合质谱、一维核磁、二维核磁方法对分离纯化出的4 个相关杂质进行结构鉴定，发现杂质I为阿尼芬净开环产物，杂质II和杂质III分别为吡咯烷环部位或苏氨酸部位少一个甲基的阿尼芬净类似物，而杂质VIII为多一个甲醚结构的阿尼芬净类似物。结合文献及合成工艺路线分析，我们推断杂质I为阿尼芬净水解开环产物，杂质II、杂质III和杂质VIII为合成起始原料中棘白菌素类杂质随合成反应生成的过程杂质。本研究工作不仅首次采用HPLC方法系统分析比较了自制阿尼芬净原料药与辉瑞公司产品中相关杂质的分布情况，而且采用制备色谱方法从原料药中分离纯化出的4个相关杂质，并结合各种波谱学方法对其进行详细的结构鉴定，发现3个为未见报道的新化合物，通过本研究工作可以为阿尼芬净质量信息提供参考，同时对杂质形成来源进行分析也有利于改进生成工艺，提高阿尼芬净药物质量。 |
| 语种 | 中文 |
| 学科主题 | 天然产物研究 |
| 产权排序 | 1 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://210.75.237.14/handle/351003/28859]  |
| 专题 | 成都生物研究所_天然产物研究 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 赵澜宁. 万古霉素及阿尼芬净相关杂质分离鉴定与活性研究[D]. 中国科学院大学. 2017. |
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