hex1基因在深绿木霉耐受敌敌畏中的作用

CORC > 上海交通大学

	hex1基因在深绿木霉耐受敌敌畏中的作用
	唐俊 ; 陈捷
	2012-04-24 ; 2012-04-24
会议名称	中国福建厦门中国植物病理学会第九届全国会员代表大会暨2010年学术年会
关键词	深绿木霉 hexl基因基因敲除荧光定位
中文摘要	研究木霉菌耐受有机磷农药分子机理,对于在病害综合防治中协调使用木霉菌剂和化学杀菌剂具有重要意义。通过gene walking技术获得hex1基因的两侧序列,再分别使用引物对T23knock-Sac I/T23knock-NotⅠ和T23knock-HindⅢ/T23knock-XhoⅠ扩增hex1的825bp的5'端和1083 bp的3'端同源臂。首先,将T23knock-HindⅢ/T23knock-XhoⅠ扩增的1083bp PCR产物用HindⅢ和XhoⅠ双酶切并经凝胶电泳回收,连接到同样经双酶切的pV2载体上构成重组质粒pV-T23k2。然后,将T23knock-SacⅠ/T23knock-NotⅠ扩增的825 bpPCR产物用SacⅠ和NotⅠ双酶切并经凝胶电泳回收,连接到同样经双酶切的pV-T23k2载体上构成重组质粒pV-T23k2-1。最后,酶切检测并经测序验证敲除载体构建正确。以潮霉素抗性基因为筛选标记,通过PEG介导的原生质体融合技术获得了近200株转化子,通过在DNA和RNA水平上的进一步检测,最终筛选到1株hex1基因敲除子△hex1。通过与野生菌T23的比较发现,敲除子△hex1在PDA培养基上的生长速度稍慢,△hex1在液体培养基Burk(含DDV 300μg/ml)培养3d后,敲除子对敌敌畏降解率较野生菌小10%;菌丝电解质外渗差异分析显示,△hex1菌丝在任一时段的电导率均高于野生菌。通过透射电子显微镜观察发现,在1000μg/ml敌敌畏胁迫下,△hex1菌丝内容物明显较野生菌破坏严重。进一步,构建了含G418抗性标记的hex1互补载体,并初步获得了20株互补子,拟进一步结合对野生菌、敲除子和互补子的性状分析,深入阐释hex1在深绿耐受有机磷农药敌敌畏方面的重要作用。同时,构建了eGFP和hex1基因融合表达载体,转化深绿木霉后通过对菌丝进行激光共聚集显微观察,定位了HEX1蛋白在木霉菌丝的横隔和尖端处表达。
会议录	http://epub.edu.cnki.net/grid2008/brief/detailj.aspx?filename=ZGVS201007001368&dbname=CPFD2011
会议录出版者	中国农业科学技术出版社
语种	中文
内容类型	会议论文
源URL	[http://ir.calis.edu.cn/hdl/231030/639]
专题	上海交通大学
推荐引用方式 GB/T 7714	唐俊,陈捷. hex1基因在深绿木霉耐受敌敌畏中的作用[C]. 见:中国福建厦门中国植物病理学会第九届全国会员代表大会暨2010年学术年会.