人IgE-Fc结构域的基因克隆、原核表达及单克隆抗体的制备

	人IgE-Fc结构域的基因克隆、原核表达及单克隆抗体的制备
	崔璐璐; 毕嘉成; 李俊鑫; 刘绿艳; 叶秀峰; 郑明星; 万晓春; 于广
刊名	中国医药生物技术
	2016
英文摘要	目的通过制备小鼠抗人IgE单克隆抗体,为过敏性疾病的研究及诊断打下基础。方法以CRL8033细胞的cDNA为模板扩增人IgE Fcε3-4段基因序列并将其连接到p ET-32a（＋）载体中,转化BL21（DE3）大肠杆菌并进行表达。然后将表达所得包涵体进行变复性,把复性所得蛋白进行亲和纯化,通过SDS-PAGE验证纯化效果。最后将纯化的蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,经三次免疫后取小鼠脾脏细胞与SP2/0细胞融合。用ELISA法筛选出能结合人IgE蛋白的阳性克隆,并应用ELISA、Western blot等手段对杂交瘤所分泌单克隆抗体的特异性进行鉴定。结果成功构建p ET-32a（＋）-IgE Fcε3-4载体并纯化IgE Fcε3-4蛋白。用该蛋白作为免疫原免疫小鼠,成功制备了杂交瘤细胞株,其分泌的单克隆抗体能够特异性结合人IgE蛋白,可用于ELISA、Western blot等手段对人IgE的检测。结论成功获得了可用于特异性检测人IgE蛋白的单克隆抗体,为人IgE的检测及哮喘等过敏性疾病的研究、诊断及治疗奠定了基础。
收录类别	其他
原文出处	http://www.cqvip.com/qk/88816x/201603/669253461.html
语种	中文
内容类型	期刊论文
源URL	[http://ir.siat.ac.cn:8080/handle/172644/10730]
专题	深圳先进技术研究院_医药所
作者单位	中国医药生物技术
推荐引用方式 GB/T 7714	崔璐璐,毕嘉成,李俊鑫,等. 人IgE-Fc结构域的基因克隆、原核表达及单克隆抗体的制备[J]. 中国医药生物技术,2016.
APA	崔璐璐.,毕嘉成.,李俊鑫.,刘绿艳.,叶秀峰.,...&于广.(2016).人IgE-Fc结构域的基因克隆、原核表达及单克隆抗体的制备.中国医药生物技术.
MLA	崔璐璐,et al."人IgE-Fc结构域的基因克隆、原核表达及单克隆抗体的制备".中国医药生物技术 (2016).