| 题名 | 慢生型大豆根瘤菌GX201脯氨酸脱氢酶基因的克隆和鉴定 |
| 作者 | 何曙光 |
| 学位类别 | 博士 |
| 答辩日期 | 1998 |
| 授予单位 | 中国科学院沈阳应用生态研究所 |
| 授予地点 | 中国科学院沈阳应用生态研究所 |
| 关键词 | 慢生型大豆根瘤菌 脯氨酸脱氢酶基因 基因文库 |
| 学位专业 | 微生物学 |
| 中文摘要 | 以广谱宿主范围柯斯质粒pLAFR3为载体在大肠杆菌菌DH5α中构建了慢生型大豆根瘤菌菌株GX201的一个基因文库。根据已报道的慢生型大豆根瘤菌菌株JH的脯氨酸脱氢酶基因序列的高度保守区域设计了一对寡核苷酸引物，应用该对引物通过PCR从慢生型大豆根瘤菌GX201基因组DNA中扩增出一个PCR产物，DNA测序表明该产物为443bp，它和慢生型大豆根瘤菌JH的脯氨酸脱氢酶基因具有93.54%的同源性。以该PCR产物为探针和慢生型大豆根瘤菌GX201基因文库作菌落原位杂交，一共得到5个可能的阳性克隆。再以该PCR产物和这些阳性克隆的EcoRI酶切片的质粒DNA Southern杂交，结果只有一个克隆的红2.5kb EcoRI片段显示杂交，该重组质粒被命名为PGXN300，其上含有约16kb的插入片段，确定了BamHI EcoRI和PstI在该DNA顺序上的酶切位点，杂交的2.5kb EcoRI片段位于插入片段的中间位置。通过三亲本接合将pGXN300导入到快生型大豆根瘤菌HN01中而获得工程菌GX300。植株水培法结瘤试验表明GX300比出发菌株HN01在大豆柳江1号上的结瘤数显著提高，但根瘤的重量和植株干重与出发菌株相比并没有差异。 |
| 语种 | 中文 |
| 公开日期 | 2010-12-15 ; 2011-04-29 |
| 页码 | 97 |
| 内容类型 | 学位论文 |
| 源URL | [http://210.72.129.5/handle/321005/3019]  |
| 专题 | 沈阳应用生态研究所_沈阳应用生态研究所_学位论文 |
| 推荐引用方式 GB/T 7714 | 何曙光. 慢生型大豆根瘤菌GX201脯氨酸脱氢酶基因的克隆和鉴定[D]. 中国科学院沈阳应用生态研究所. 中国科学院沈阳应用生态研究所. 1998. |
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